科學家又花了 15 年,才開始把工程手法處理過的基因送到人體細胞內,目標與製造藥物的目的相似。由於沒有試圖變更患者的 DNA,所以不是基因編輯。這種基因療法將一些基因工程 DNA 送入患者細胞內,修正致病的基因。
基因療法的初次實驗發生在 1990 年,對象是一名 4 歲的小女孩,她因為基因突變而導致免疫系統失效,一直活在感染威脅中。醫生找到一種方法,把缺失基因的有效副本移入小女孩血液系統中的 T 細胞內。作法是從她體內取出 T 細胞,放入缺失的基因,再將 T 細胞重新移回她體內。這個作法為她的免疫系統帶來了戲劇化的改善,也讓她能過健康的生活。
除了透過基因療法治療基因問題,研究人員開始設法從源頭解決問題,目標是針對患者體內相關細胞的 DNA 瑕疵序列進行編輯。稱為基因編輯的努力就此誕生。
哈佛教授傑克.索斯達克,同時也是道納的論文指導教授,在 1980 年代發現了編輯基因其中一個關鍵:必須讓 DNA 雙螺旋的兩股都斷裂,即雙股斷裂。當 DNA 的雙股斷裂時,任何一股都無法再成為修復另一股鍵的模版。基因有兩種自我修復的方式。
第一種方式被稱為「非同源性末端接合」(英文名稱 nonhomologous end-joining 中的「Homologous」源於希臘字,意思是「匹配」。)在這樣的例子中,只要簡單地把兩端接起來,不需要找一條相配的序列,就完成 DNA 修復。這種修復方式相當馬虎,可能造成遺傳物質不必要的插入與刪除。
另一種較為精準的過程被稱為「同源基因引導修復」(homology-directed repair),是被切斷的 DNA 在附近找到一個合適的取代模版時的狀況。當雙股斷裂出現時,細胞通常都會複製並插入可以取得的同源性序列。
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基因編輯的發明需要兩個步驟。第一,研究人員必須找到可以在 DNA 內裁切出雙股斷裂的正確酵素。第二,他們必須找到一個嚮導,帶領酵素抵達他們想要在細胞 DNA 內進行裁切的精準目的地。
有能力裁切 DNA 或 RNA 的酵素稱做核酸酶。為了建立基因編輯系統,研究人員需要一個可以遵守指令,裁切選定的任何序列目標的核酸酶。到了 2000 年,他們找到了一種可以做到這一點的工具。
若要成功編輯特定基因,不只需要能作為 DNA 剪刀的酵素,還需要有適合的物質引導基因剪刀剪下正確片段。圖/Pixabay
在某些土壤與池塘細菌體內發現的 FokI 酵素有兩個區域,一個區域可以充當裁切 DNA 的剪刀,另一個區域則是可以成為剪刀的嚮導,告訴剪刀該往哪裡去。這兩個區域可以分離,其中第一項區域也可以透過重新設定,去任何研究人員想要它去的地方。
研究人員能夠設計出擔任嚮導的蛋白質,引導裁切區域到目標 DNA 序列之處。鋅指核酸酶(ZFNs)是一種系統,將裁切區域與一種蛋白質融合在一起,而這種蛋白質有一根根因為鋅離子存在而凸起的小小指頭,可以抓住特定的 DNA 序列。另一種類似但甚至更靠得住的方法被稱為 TALENs(類轉錄活化因子核酸酶),是指將裁切區域與可以引導這個區域到較長 DNA 序列處的一種蛋白質融合的做法。
1990 年,融合蛋白 CD4 免疫黏附素(CD4 immunoadhesin)誕生。這項設計,是為了對付令人類聞風喪膽的 HIV 病毒。
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我們知道 T 細胞是人體中一種非常重要的白血球。在這些 T 細胞中,大約有六到七成表面帶有一個叫做「CD4」的輔助受體。CD4 會和另一個受體 TCR 一起合作,幫助 T 細胞辨識其他細胞表面的抗原片段,等於是 T 細胞用來辨認壞人的「探測器」。表面擁有 CD4 受體的淋巴球,就稱為 CD4 淋巴球。
麻煩的來了。 HIV 病毒反將一軍,竟然把 T 細胞的 CD4 探測器,當成了自己辨識獵物的「標記」。沒錯,對 HIV 病毒來說,免疫細胞就是它的獵物。HIV 的表面有一種叫做 gp120 的蛋白,會主動去抓住 T 細胞上的 CD4 受體。
而另一端的 Fc 區域則有兩個重要作用:一是延長融合蛋白在體內的存活時間;二是理論上能掛上「這裡有敵人!」的標籤,這種機制稱為抗體依賴性細胞毒殺(ADCC)或免疫吞噬作用(ADCP)。當免疫細胞的 Fc 受體與 Fc 區域結合,就能促使免疫細胞清除被黏住的病毒顆粒。
不過,這裡有個關鍵細節。
在實際設計中,CD4免疫黏附素的 Fc 片段通常會關閉「吸引免疫細胞」的這個技能。原因是:HIV 專門攻擊的就是免疫細胞本身,許多病毒甚至已經藏在 CD4 細胞裡。若 Fc 區域過於活躍,反而可能引發強烈的發炎反應,甚至讓免疫系統錯把帶有病毒碎片的健康細胞也一併攻擊,這樣副作用太大。因此,CD4 免疫黏附素的 Fc 區域會加入特定突變,讓它只保留延長藥物壽命的功能,而不會與淋巴球的 Fc 受體結合,以避免誘發免疫反應。
從 DNA 藍圖到生物積木:融合蛋白的設計巧思
融合蛋白雖然潛力強大,但要製造出來可一點都不簡單。它並不是用膠水把兩段蛋白質黏在一起就好。「融合」這件事,得從最根本的設計圖,也就是 DNA 序列就開始規劃。
我們體內的大部分蛋白質,都是細胞照著 DNA 上的指令一步步合成的。所以,如果科學家想把蛋白 A 和蛋白 B 接在一起,就得先把這兩段基因找出來,然後再「拼」成一段新的 DNA。
男性和女性的 DNA 差異極小,僅限於在女性身上為X或男性為Y的那單一染色體。姊弟或兄妹從完全相同的來源取得基因,透過重組母親和父親的 DNA,確保兄弟姊妹絕對不會相近到變成複製人。
性別分化過程大部分要歸結到 Y 染色體上的「SRY 基因」,它的全名是「Y 染色體性別決定區基因」。若要說有「運動能力基因」,那就非 SRY 基因莫屬了。人類生物學的安排,就是讓同樣的雙親能夠同時生育出男性的兒子和女性的女兒,即使傳遞的是相同的基因。SRY 基因是一把 DNA 萬能鑰匙,會選擇性地啟動發育成男性的基因。