透明標本製作－《透視．魚》

觀察生物骨骼的方法有很多種，一般主要以製作乾製骨骼標本、拍攝X光與製作透明染色生物骨骼為主。乾製骨骼標本製作為比較解剖學上重要的方法之一，分離後的骨頭可提供分類、演化等研究之運用。但此方法在製作過程中，常會導致部分生物骨骼組織的溶解。因此，當骨骼需要重新再組合作其他應用時，常會發生組裝不易的情形，甚至發生組裝上的錯誤。而利用X光拍攝骨骼時，雖然囿於生物體型態大小而有較多的限制，但卻能夠在不破壞生物外觀下進行體內骨骼的觀察。另外，因為影像是平面圖像，要獲得立體之相對位置必須多方位拍攝才行。而且X光的設備安全需求較高，人員也需通過證照考試，加上經費的需求較高，常讓一般的實驗室卻步。

本書所利用的透明骨骼染色法，是利用特殊藥品將生物體的肌肉組織透明化後，再利用特殊染劑將骨骼進行二重染色，讓生物標本依骨骼成分呈現不同的紅藍兩色。此方法不但能夠避免了在製作過程中骨骼遺失與錯位的問題；費用方面也較X光照射法來得便宜許多，同時亦提供了立體的標本觀察角度。

準備物品

藥品： 10%福馬林 95%酒精 0.1%雙氧水 冰醋酸 胰蛋白脢（酵素） 硼酸鈉 氫氧化鉀 茜素紅 亞里西安蘭 甘油

作業器材： 存放標本之容器 鑷子 解剖刀 藥杓 電子天秤 量筒

製作步驟：

1. 標本選擇（tip：一般以體型小於20公分的標本為佳。大型標本所需的耗材與時間花費相對較多，且建議需先將內臟去除。）
2. 標本固定（tip：利用10%福馬林浸泡一週時間。盡量使用新鮮之標本，保存過久會讓肌肉呈現偏黃的色澤，較不美觀。）

3. 水洗（tip：利用流水沖洗標本數目，將標本體內之福馬林固定液洗掉。）
4. 漂白（tip：將標本泡在0.1%雙氧水中一天。此步驟是為了將魚體體表之色素去除。過程中需注意避免將容器密封，若密封會導致容器中壓力上升以致魚體破裂。不過有時當標本非用於學術研究時，可省略此步驟，透明後的魚體會呈現出另一種不同的感覺。）
5. 酒精溶液替換1
   30%酒精→50%酒精→70%酒精→95%酒精
   （tip：間已30分鐘至1小時更換一次為佳，用以調節魚體內滲透壓平衡。）
6. 軟骨染色（tip：軟骨染劑製備－將冰醋酸與95%酒精以體積比1：4混合後，加入亞里西安藍染劑至溶液成深藍色，將標本浸泡一天即可。可藉由觀察尾鰭或背鰭是否染成藍色來辨識判定，並可避光於冰箱低溫保存以延長使用的時間。）

7. 酒精溶液替換2
   95%酒精→70%酒精→50%酒精→30%酒精→純水
   （tip：每一階段浸泡直至標本沉入底部後再進行更換。）
8. 浸泡胰蛋白脢（酵素）
   （tip：胰蛋白脢（酵素）溶液製備－將2.4g硼酸鈉溶於100毫升的水中後，加入1克之胰蛋白脢即可。可利用烘箱將保存溫度提昇至35~40°C以提高反應的效率。約每一週更換一次以加快製作速度，直至稍見骨骼即可。）
9. 浸泡0.5%氫氧化鉀溶液1（tip：用來調節魚體滲透壓。）
10. 硬骨染色（tip：硬骨染劑製備－於0.5%氫氧化鉀溶液加入茜素紅至深紫色後，將標本浸泡一天即可。）

11. 浸泡0.5%氫氧化鉀溶液2（tip：用來將硬骨染劑進行脫色。）
12. 浸泡混合液（0.5%氫氧化鉀：甘油=3：1）
    （tip：不同溶液比例下各浸泡直至魚體沉入底部後，多等待1~2天再進行下一個階段。）
13. 浸泡混合液（0.5%氫氧化鉀：甘油=1：1）
14. 浸泡混合液（0.5%氫氧化鉀：甘油=1：3）
15. 浸泡純甘油保存（tip：將標本放入保存容器後勿加滿，需留下一些空隙，因甘油在高溫下會膨脹，常容易導致液體滲出。）

摘自《透視．魚》，時報出版